Waad ku mahadsan tahay booqashada Nature.com. Nooca biraawsarka aad isticmaaleyso wuxuu leeyahay taageero xaddidan oo CSS ah. Waayo-aragnimada ugu fiican, waxaan kugula talineynaa inaad isticmaasho biraawsar la cusbooneysiiyay (ama aad damiso qaabka is-waafajinta ee Internet Explorer). Dhanka kale, si loo hubiyo taageerada joogtada ah, waxaan soo bandhigi doonnaa goobta iyada oo aan lahayn qaabab iyo JavaScript.
Nanoparticles-ka Insulin-ka (NPs) oo leh rar badan ayaa helay codsiyo kala duwan qaabab qiyaaseed oo kala duwan. Shaqadani waxay higsaneysaa in lagu qiimeeyo saameynta hababka qaboojinta-qallajinta iyo qalajinta-buufinta ee qaab-dhismeedka nanoparticles-ka chitosan ee insulin-ka ku jira, iyadoo leh ama aan lahayn mannitol oo ah cryoprotectant. Waxaan sidoo kale qiimeynay tayada nanoparticles-kan annagoo dib u kala furfuray. Kahor fuuq-baxa, cabbirka walxaha ee nanoparticles-ka chitosan/sodium tripolyphosphate/insulin-ka isku-xidhan ayaa loo habeeyay inuu noqdo 318 nm, PDI-du waxay ahayd 0.18, waxtarka daboolista wuxuu ahaa 99.4%, rarkana wuxuu ahaa 25.01%. Ka dib dib-u-habaynta, dhammaan nanoparticles-ka, marka laga reebo kuwa lagu soo saaro habka qaboojinta-qallajinta iyada oo aan la isticmaalin mannitol, waxay ilaaliyeen qaab-dhismeedkooda walxaha wareegsan. Marka la barbardhigo nanoparticles-ka ku jira mannitol ee ay fuuq-baxaan midkoodna, nanoparticles-ka buufinta-la'aanta ah ee mannitol-ka ayaa sidoo kale muujiyay cabbirka ugu yar ee walxaha (376 nm) iyo heerka ugu sarreeya ee rarista (25.02%) oo leh isku mid ah Heerka kaydinta (98.7%) iyo PDI (0.20) iyadoo la adeegsanayo farsamooyinka qalajinta ama qalajinta-qaboojinta. Nanoparticles-ka la qalajiyey iyadoo la isticmaalayo buufinta iyada oo aan la isticmaalin mannitol ayaa sidoo kale keenay sii deynta ugu dhaqsaha badan ee insulin iyo hufnaanta ugu sarreysa ee qaadashada unugyada. Shaqadani waxay muujinaysaa in qalajinta buufintu ay fuuq-bixin karto nanoparticles-ka insulin-ka iyada oo aan loo baahnayn cryoprotectants marka la barbar dhigo hababka qalajinta barafaynta caadiga ah, taasoo abuuraysa awood rarid oo weyn, shuruudaha lagu daro oo hooseeya iyo kharashyada hawlgalka faa'iido weyn.
Tan iyo markii la helay 19221,2,3, insulin iyo diyaargarowgeeda daawada ayaa badbaadiyay nolosha bukaanada qaba nooca 1aad ee sonkorowga (T1DM) iyo nooca 2aad ee sonkorowga (T1DM). Si kastaba ha ahaatee, sababtoo ah sifooyinka ay leedahay borotiinka miisaanka molecular-ka oo sarreeya, insulin si fudud ayaa loo isku daraa, waxaa burburiya enzymes-ka proteolytic, waxaana baabi'iya saamaynta hore ee gudbinta. Dadka lagu ogaado sonkorowga nooca 1aad waxay u baahan yihiin irbado insulin inta ka dhiman noloshooda. Bukaanno badan oo markii hore lagu ogaaday sonkorowga nooca 2aad ayaa sidoo kale u baahan irbado insulin muddo dheer ah. Cirbadaha insulin-ta maalinlaha ah waa il halis ah oo xanuun iyo raaxo darro maalinle ah u keena shakhsiyaadkan, iyadoo saameyn xun ku leh caafimaadka maskaxda. Natiijo ahaan, noocyada kale ee maamulka insulin-ta ee keena raaxo la'aan yar, sida maamulka insulin-ta afka laga qaato, ayaa si ballaaran loo baarayaa5 maadaama ay leeyihiin awood ay ku soo celiyaan tayada nolosha qiyaastii 5 bilyan oo qof oo qaba sonkorowga adduunka oo dhan.
Tiknoolajiyadda Nanoparticle waxay bixisay horumar muhiim ah isku dayga lagu qaadanayo insulin-ta afka laga qaato4,6,7. Mid si wax ku ool ah u duubta oo ka ilaalisa insulin-ta inay burburto si loogu geeyo goobaha gaarka ah ee jirka. Si kastaba ha ahaatee, isticmaalka qaacidooyinka nanoparticle waxay leedahay dhowr xaddidaad, inta badan sababtoo ah arrimaha xasilloonida ee joojinta walxaha. Ururinta qaar ayaa dhici karta inta lagu jiro kaydinta, taas oo yaraynaysa helitaanka noolaha nanoparticles-ka insulin-ka ku raran8. Intaa waxaa dheer, xasilloonida kiimikada ee matrix-ka polymer-ka ee nanoparticles iyo insulin-ka waa in sidoo kale la tixgeliyaa si loo hubiyo xasilloonida nanoparticles-ka insulin (NPs). Waqtigan xaadirka ah, tignoolajiyada qaboojinta-qallajinta waa heerka dahabka ah ee lagu abuurayo NP-yada deggan iyadoo laga hortagayo isbeddellada aan loo baahnayn inta lagu jiro kaydinta9.
Si kastaba ha ahaatee, qaboojinta-qallajinta waxay u baahan tahay in lagu daro cryoprotectants si looga hortago qaab-dhismeedka wareegsan ee NPs-ka inuu saameeyo cadaadiska farsamada ee kiristaalo baraf ah. Tani waxay si weyn u yareyneysaa rarista nanoparticles-ka insulin-ka ka dib lyophilization, maadaama cryoprotectant-ku uu haysto inta badan saamiga miisaanka. Sidaa darteed, NP-yada insulin-ka ee la soo saaray waxaa badanaa la ogaadaa inaysan ku habboonayn soo saarista qaacidooyinka budada qalalan, sida kiniiniyada afka laga qaato iyo filimada afka laga qaato, sababtoo ah baahida loo qabo xaddi badan oo nanoparticles qalalan si loo gaaro daaqadda daaweynta ee insulin-ta.
Qallajinta buufinta waa hab warshadeed oo caan ah oo raqiis ah oo lagu soo saaro budo qalalan oo ka imanaya marxaladaha dareeraha ah ee warshadaha dawooyinka10,11. Xakamaynta habka sameynta walxaha waxay u oggolaanaysaa in si habboon loo daboolo dhowr iskudhis oo firfircoon 12, 13. Intaa waxaa dheer, waxay noqotay farsamo wax ku ool ah oo loogu talagalay diyaarinta borotiinnada ku jira qafisyada si afka looga qaato. Inta lagu jiro qalajinta buufinta, biyuhu si dhakhso ah ayay u uumi baxaan, taas oo ka caawisa in heerkulka xudunta walxaha uu hooseeyo11,14, taasoo u suurtagelinaysa codsigeeda in lagu daboolo qaybaha xasaasiga u ah kulaylka. Kahor qalajinta buufinta, walxaha dahaarka waa in si buuxda loogu mideeyaa xalka ay ku jiraan maaddooyinka ku jira qafisyada11,14. Si ka duwan qalajinta barafowga, isku-dhafka ka hor inta aan lagu darin qalajinta buufinta waxay hagaajisaa hufnaanta daboolista inta lagu jiro fuuq-baxa. Maadaama habka daboolidda buufinta uusan u baahnayn cryoprotectants, qalajinta buufinta waxaa loo isticmaali karaa in lagu soo saaro NP-yada qalalan oo leh waxyaabo badan oo rarka ah.
Daraasaddani waxay soo sheegaysaa soo saarista NP-yada insulin-ka ku raran iyadoo la isku xirayo chitosan iyo sodium tripolyphosphate iyadoo la adeegsanayo habka jel ion. Jelitaanka ion waa hab diyaarin ah oo u oggolaanaya soo saarista nanoparticles iyada oo loo marayo isdhexgalka elektrostatic ee u dhexeeya laba ama in ka badan oo nooc ionic ah xaalado gaar ah. Labada farsamo ee qaboojinta-qallajinta iyo buufinta-qallajinta ayaa loo isticmaalay in lagu fuuq-celiyo nanoparticles-ka chitosan/sodium tripolyphosphate/insulin ee isku-xidhan. Ka dib fuuq-baxa, qaab-dhismeedkooda waxaa falanqeeyay SEM. Awooddooda isku-darka waxaa lagu qiimeeyay iyadoo la cabbirayo qaybintooda cabbirka, dallacaadda dusha sare, PDI, hufnaanta kaydinta, iyo waxa ku jira rarista. Tayada nanoparticles-ka dib loo milicsaday ee ay soo saaraan habab kala duwan oo fuuq-baxa ayaa sidoo kale lagu qiimeeyay iyadoo la barbar dhigayo ilaalintooda insulin, dhaqanka sii deynta, iyo waxtarka qaadashada unugyada.
pH-ga xalka isku dhafan iyo saamiga chitosan iyo insulin-ta waa laba arrimood oo muhiim ah oo saameeya cabbirka walxaha iyo waxtarka daboolidda (EE) ee NP-yada kama dambaysta ah, maadaama ay si toos ah u saameeyaan habka isku-darka ionotropic. pH-ga xalka isku dhafan waxaa la muujiyay inuu si aad ah ula xiriiray cabbirka walxaha iyo hufnaanta daboolidda (Jaantuska 1a). Sida ka muuqata Jaantuska 1a, markii pH-gu uu ka kordhay 4.0 ilaa 6.0, celceliska cabbirka walxaha (nm) ayaa hoos u dhacay EE-na si weyn ayuu u kordhay, halka markii pH-gu uu kordhay 6.5, celceliska cabbirka walxaha ayaa bilaabay inuu kordho EE-na uusan isbeddelin. Maadaama saamiga chitosan iyo insulin-ta uu kordhayo, celceliska cabbirka walxaha ayaa sidoo kale kordha. Intaa waxaa dheer, wax isbeddel ah oo ku yimid EE lama arag markii nanoparticles-ka lagu diyaariyey saamiga cufka ee chitosan/insulin oo ka sarreeya 2.5:1 (w/w) (Jaantuska 1b). Sidaa darteed, xaaladaha diyaarinta ugu wanaagsan ee daraasaddan (pH 6.0, saamiga cufka chitosan/insulin ee 2.5:1) ayaa loo isticmaalay diyaarinta Nanoparticles-ka insulin-ka ku jira si loo sii wado daraasad dheeraad ah. Xaaladda diyaarinta, celceliska cabbirka walxaha ee nanoparticles-ka insulin-ka waxaa loo habeeyay inuu noqdo 318 nm (Jaantuska 1c), PDI-du wuxuu ahaa 0.18, hufnaanta ku-xidhnaanta waxay ahayd 99.4%, awoodda zeta waxay ahayd 9.8 mv, rarka insulin-tuna wuxuu ahaa 25.01% (m/m). Iyada oo lagu saleynayo natiijooyinka gudbinta elektaroonigga elektaroonigga ah (TEM), nanoparticles-ka la hagaajiyay waxay ahaayeen kuwo wareegsan oo kala go'an oo leh cabbir isku mid ah (Jaantuska 1d).
Hagaajinta halbeegga ee nanoparticles-ka insulin-ta: (a) saameynta pH-ga ee dhexroorka celceliska iyo hufnaanta daboolidda (EE) ee nanoparticles-ka insulin-ta (oo lagu diyaariyey saamiga cufka 5:1 ee chitosan iyo insulin); (b) chitosan iyo Saamaynta saamiga cufka ee insulin-ta ee dhexroorka celceliska iyo hufnaanta daboolidda (EE) ee insulin-ta NP-yada (oo lagu diyaariyey pH 6); (c) qaybinta cabbirka walxaha ee nanoparticles-ka insulin-ta ee la hagaajiyay; (d) Micrograph-ka TEM ee NP-yada insulin-ta ee la hagaajiyay.
Waa la ogyahay in chitosan uu yahay polyelectrolyte daciif ah oo leh pKa oo ah 6.5. Waxaa si togan loogu dallacaa warbaahinta aashitada sababtoo ah kooxdeeda amino ee ugu weyn waxaa soo saara ion-yada hydrogen15. Sidaa darteed, waxaa badanaa loo isticmaalaa sidii side si loogu duubo macromolecules-ka si taban loo dallacay. Daraasaddan, chitosan waxaa loo isticmaalay in lagu duubo insulin iyadoo leh dhibic isoelectric ah oo ah 5.3. Maadaama chitosan loo isticmaalo sidii walxo dahaar ah, iyadoo la kordhinayo saamigeeda, dhumucda lakabka dibadda ee nanoparticles ayaa si isku mid ah u kordheysa, taasoo keentay cabbir dhexdhexaad ah oo weyn. Intaa waxaa dheer, heerarka sare ee chitosan waxay ku dari karaan insulin badan. Xaaladdeenna, EE wuxuu ahaa kii ugu sarreeyay markii saamiga chitosan iyo insulin-tu ay gaareen 2.5:1, mana jirin wax isbeddel ah oo muhiim ah oo ku yimid EE markii saamiga uu sii kordhayay.
Marka laga soo tago saamiga chitosan iyo insulin, pH sidoo kale waxay door muhiim ah ka ciyaareen diyaarinta NPs.Gan et al. 17 waxay daraasad ku sameeyeen saameynta pH ee cabbirka walxaha ee nanoparticles-ka chitosan. Waxay heleen hoos u dhac joogto ah oo ku yimid cabbirka walxaha ilaa pH uu gaaro 6.0, waxaana la arkay koror weyn oo ku yimid cabbirka walxaha pH > 6.0, taas oo la jaanqaadaysa indha-indheynteena. Dhacdadan waxay sabab u tahay xaqiiqda ah in marka pH sii kordho, molecule-ka insulin-tu uu helo dallac dusha sare oo taban, sidaas darteed, wuxuu doorbidaa isdhexgalka elektrostatic-ka ee isku-dhafka chitosan/sodium tripolyphosphate (TPP), taasoo keentay cabbir yar oo walxaha ah iyo EE sare. Si kastaba ha ahaatee, markii pH-ga loo hagaajiyay 6.5, kooxaha amino-ka ee chitosan waa la baabi'iyay, taasoo keentay in chitosan la laabo. Sidaa darteed, pH-ga sare wuxuu keenaa soo-gaadhis yar oo amino ions ah oo ku saabsan TPP iyo insulin, taasoo keentay isku-xidhka hoose, cabbirka ugu dambeeya ee ugu weyn iyo EE hoose.
Falanqaynta sifooyinka qaab-dhismeedka ee NP-yada la qaboojiyey iyo kuwa la buufiyey waxay hagi kartaa xulashada fuuq-baxa wanaagsan iyo farsamooyinka sameynta budada. Habka la door bidayo waa inuu bixiyaa xasilloonida daawada, qaabka walxaha isku midka ah, rarka daawada oo sarreeya iyo milmi wanaagsan xalka asalka ah. Daraasaddan, si loo barbar dhigo labada farsamo, NP-yada insulin-ka oo leh ama aan lahayn 1% mannitol ayaa la isticmaalay inta lagu jiro fuuq-baxa. Mannitol waxaa loo isticmaalaa sidii wakiil bulking ama cryoprotectant qaabab kala duwan oo budada qalalan ah si loogu qalajiyo qaboojinta iyo qalajinta buufinta. Nanoparticles-ka insulin-ka ee lyophilized oo aan lahayn mannitol, sida lagu muujiyey Jaantuska 2a, qaab-dhismeed budo aad u daloolsan oo leh dusha sare oo waaweyn, aan joogto ahayn iyo qallafsan ayaa lagu arkay iyadoo la adeegsanayo mikroskoobka elektaroonigga ah (SEM). Qaybo yar oo kala go'an ayaa laga helay budada ka dib fuuq-baxa (Jaantuska 2e). Natiijooyinkani waxay muujiyeen in inta badan NP-yada la gooyay inta lagu jiro qalajinta qaboojinta iyada oo aan lahayn wax cryoprotectant ah. Nanoparticles-ka insulin-ka ee la qaboojiyey iyo kuwa la buufiyey oo ka kooban 1% mannitol, nanoparticles-ka wareegsan oo leh dusha siman ayaa la arkay (Jaantuska 2b,d,f,h). Insulin-ka nanoparticles-ka lagu buufiyo iyada oo aan lahayn mannitol waxay ahaayeen kuwo wareegsan laakiin waxay ku duuduubnaayeen dusha sare (Jaantuska 2c). Dusha sare ee wareegsan iyo kuwa la laalaaban ayaa si dheeraad ah looga hadlay tijaabooyinka dhaqanka sii deynta iyo qaadashada unugyada ee hoose. Iyada oo lagu saleynayo muuqaalka muuqda ee NP-yada la qalajiyey, NP-yada la buufiyay ee aan lahayn mannitol iyo NP-yada la qaboojiyey oo lagu buufiyey mannitol waxay soo saareen budo NPs oo fiican (Jaantuska 2f,g,h). Inta ay baaxadda weyn tahay aagga dusha sare ee u dhexeeya dusha sare ee walxaha, ayaa milmi kara oo sarreeya sidaas darteedna heerka sii deynta ayaa sarreeya.
Qaab-dhismeedka insulin-ta fuuq-baxa ee kala duwan: (a) Sawirka SEM ee insulin-ta lyophilized NPs oo aan lahayn mannitol; (b) Sawirka SEM ee insulin-ta lyophilized NPs oo leh mannitol; (c) insulin-ta NPs ee buufinta leh oo aan lahayn mannitol Sawirka SEM ee ; (d) Sawirka SEM ee insulin-ta NPs ee lagu buufiyay mannitol; (e) Sawirka insulin-ta lyophilized NPs ee aan lahayn mannitol; (f) Sawirka insulin-ta lyophilized NPs oo leh mannitol; (g) Sawirka insulin-ta NPs ee lagu buufiyay oo aan lahayn mannitol; (h) Sawirka insulin-ta NPs ee lagu buufiyay oo leh mannitol.
Inta lagu jiro qalajinta barafka, mannitol wuxuu u dhaqmaa sidii difaac cryoprotectant, isagoo NPs-ka ku haya qaab aan qaab lahayn isla markaana ka hortagaya waxyeelada kiristaalo baraf ah19. Taas bedelkeeda, ma jirto tallaabo baraf ah inta lagu jiro qalajinta buufinta. Sidaa darteed mannitol looma baahna habkan. Xaqiiqdii, NP-yada la buufiyay ee aan lahayn mannitol waxay soo saareen NP-yo khafiif ah sidii hore loogu sharraxay. Si kastaba ha ahaatee, mannitol wali wuxuu u dhaqmi karaa sidii buuxin habka qalajinta buufinta si uu NP-yada u siiyo qaab-dhismeed wareegsan20 (Jaantuska 2d), kaas oo ka caawiya helitaanka hab-dhaqan sii-deyn isku mid ah oo NP-yada la duubay. Intaa waxaa dheer, waa iska cad in qaar ka mid ah walxaha waaweyn lagu ogaan karo NP-yada insulin-ta la qaboojiyey iyo kuwa la buufiyey ee ay ku jiraan mannitol (Jaantuska 2b,d), taas oo laga yaabo inay sabab u tahay ururinta mannitol ee xudunta walxaha oo ay weheliso insulin-ta la daboolay. Lakabka Chitosan. Waxaa xusid mudan in daraasaddan, si loo hubiyo in qaab-dhismeedka wareegsan uu ahaado mid aan waxba tarayn ka dib fuuq-baxa, saamiga mannitol iyo chitosan waxaa lagu hayaa 5:1, si xaddi badan oo buuxin ah uu sidoo kale u weyneyn karo cabbirka walxaha NP-yada la qalajiyey..
Muuqaalka guud ee milicsiga guud ee Fourier transform infrared attenuated total reflection (FTIR-ATR) wuxuu qeexay isku darka jirka ee insulinta bilaashka ah, chitosan, chitosan, TPP iyo insulin. Dhammaan NP-yada fuuq-baxa waxaa lagu gartaa isticmaalka FTIR-ATR spectroscopy. Waxaa xusid mudan, xoojinta xargaha ee 1641, 1543 iyo 1412 cm-1 ayaa lagu arkay NP-yada la qaboojiyey ee lagu qalajiyey mannitol iyo NP-yada lagu buufiyey mannitol iyo iyada oo aan lahayn (Jaantuska 3). Sida hore loo soo sheegay, kororkan xoogga ayaa lala xiriiriyay isku-xirka u dhexeeya chitosan, TPP iyo insulin. Baaritaanka isdhexgalka ee u dhexeeya chitosan iyo insulin wuxuu muujiyay in FTIR spectra ee nanoparticles chitosan ee insulin-ka ku raran, kooxda chitosan waxay la jaanqaaday tan insulin, taasoo kordhinaysa xoojinta carbonyl (1641 cm-1) iyo suunka amine (1543 cm-1). Kooxaha tripolyphosphate ee TPP waxay ku xiran yihiin kooxaha ammonium ee chitosan, iyagoo samaynaya xarig 1412 cm-1.
Jaantusyada FTIR-ATR ee insulin-ta bilaashka ah, chitosan, isku-darka jirka ee chitosan/TPP/insulin iyo NP-yada oo lagu qalajiyey habab kala duwan.
Intaa waxaa dheer, natiijooyinkani waxay la jaan qaadayaan kuwa lagu muujiyay SEM, taasoo muujisay in NP-yada la dahaadhay ay ahaayeen kuwo aan waxba tarayn marka lagu buufiyo laguna qalajiyo mannitol, laakiin maqnaanshaha mannitol, kaliya qalajinta buufinta waxay soo saartay walxo la dahaadhay. Taas bedelkeeda, natiijooyinka FTIR-ATR ee NP-yada la qaboojiyey iyada oo aan lahayn mannitol waxay aad ugu ekaayeen isku darka jirka ee chitosan, TPP, iyo insulin. Natiijadani waxay muujinaysaa in isku-xidhka u dhexeeya chitosan, TPP iyo insulin-ta aysan hadda ku jirin NP-yada la qaboojiyey iyada oo aan lahayn mannitol. Qaab-dhismeedka NP-yada ayaa la burburiyey intii lagu jiray qalajinta qaboojinta iyada oo aan lahayn cryoprotectant, taas oo lagu arki karo natiijooyinka SEM (Jaantuska 2a). Iyada oo ku saleysan qaab-dhismeedka iyo natiijooyinka FTIR ee insulin-ta la qalajiyey NP-yada, oo la buufiyay, iyo kuwa aan lahayn mannitol ayaa loo isticmaalay tijaabooyinka dib-u-dhiska iyo NP-yada aan lahayn mannitol sababtoo ah kala-go'idda NP-yada aan lahayn mannitol inta lagu jiro fuuq-baxa. ka wada hadal.
Fuuq-baxa waxaa loo isticmaalaa kaydinta muddada dheer iyo dib-u-habaynta qaacidooyinka kale. Awoodda NP-yada qalalan ee dib-u-habaynta ka dib kaydinta ayaa muhiim u ah isticmaalkooda qaacidooyin kala duwan sida kiniiniyada iyo filimada. Waxaan ogaanay in celceliska cabbirka walxaha ee NP-yada insulin-ta ee la buufiyay ee aan lahayn mannitol uu kordhay wax yar ka dib dib-u-habaynta. Dhanka kale, cabbirka walxaha ee nanoparticles-ka insulin-ta ee la buufiyay iyo kuwa la qaboojiyey ee leh mannitol si weyn ayuu u kordhay (Jadwalka 1). PDI iyo EE si weyn looma beddelin (p > 0.05) ka dib dib-u-midaynta dhammaan NP-yada daraasaddan (Jadwalka 1). Natiijadani waxay muujinaysaa in inta badan walxaha ay ahaayeen kuwo aan waxba tarayn ka dib markii dib loo kala furfuray. Si kastaba ha ahaatee, ku darista mannitol waxay keentay in si weyn hoos loogu dhigo rarista insulin-ta ee nanoparticles-ka mannitol ee la qalajiyey iyo kuwa la buufiyey (Jadwalka 1). Taas bedelkeeda, heerka rarista insulin-ta ee NP-yada la buufiyey ee aan lahayn mannitol waxay ahayd sidii hore (Jadwalka 1).
Waa la ogyahay in rarista nanoparticles-ka ay muhiim tahay marka loo isticmaalo ujeeddooyinka keenista daawada. NP-yada leh rarista yar, xaddi aad u badan oo walxo ah ayaa loo baahan yahay si loo gaaro heerka daaweynta. Si kastaba ha ahaatee, daxalka sare ee fiirsashada NP-yadaas sare waxay keenaysaa dhib iyo dhib ku yimaada maamulka afka iyo qaacidooyinka la isku duro, siday u kala horreeyaan 22. Intaa waxaa dheer, NP-yada insulin-ta waxaa sidoo kale loo isticmaali karaa in lagu sameeyo kiniinno iyo biofilms-ka viscous23, 24, taas oo u baahan isticmaalka xaddi badan oo NP-yo ah heerarka rarista yar, taasoo keentay kiniinno waaweyn iyo biofilms qaro weyn oo aan ku habboonayn codsiyada afka. Sidaa darteed, NP-yada fuuq-baxa leh ee leh insulin-ta sare ayaa aad loo jecel yahay. Natiijooyinkayagu waxay soo jeedinayaan in culayska sare ee insulin-ta ee NP-yada aan buufin ee aan mannitol lahayn ay bixin karaan faa'iidooyin badan oo soo jiidasho leh oo loogu talagalay hababkan keenista ee kale.
Dhammaan NP-yada qallalay waxaa lagu hayay qaboojiyaha muddo saddex bilood ah. Natiijooyinka SEM waxay muujiyeen in qaab-dhismeedka dhammaan NP-yada qallalay uusan si weyn isu beddelin intii lagu jiray kaydinta saddexda bilood ah (Jaantuska 4). Ka dib markii dib loogu soo celiyay biyaha, dhammaan NP-yadu waxay muujiyeen hoos u dhac yar oo ku yimid EE waxayna sii daayeen qiyaastii xaddi yar (~5%) oo insulin ah muddadii saddexda bilood ahayd ee kaydinta (Jadwalka 2). Si kastaba ha ahaatee, celceliska cabbirka walxaha nanoparticles ayaa kordhay. Cabbirka walxaha NP-yada la qalajiyey iyada oo aan lahayn mannitol ayaa kordhay ilaa 525 nm, halka kuwa NP-yada la qalajiyey ee la qaboojiyey iyo kuwa la qaboojiyey ee leh mannitol ay kordheen ilaa 872 iyo 921 nm, siday u kala horreeyaan (Jadwalka 2).
Qaab-dhismeedka insulin-ta fuuq-baxa ee kala duwan ee la keydiyay muddo saddex bilood ah: (a) Sawirka SEM ee insulin-ta lyophilized NPs oo leh mannitol; (b) Sawirka SEM ee insulin-ta nanoparticles-ka lagu buufiyo ee aan lahayn mannitol; (c) iyada oo aan lahayn mannitol sawirrada SEM ee insulin-ta lagu buufiyo ee la qalajiyey.
Intaa waxaa dheer, waxaa lagu arkay daadad ku jira nanoparticles-ka insulin-ta ee dib loo habeeyay oo lagu buufiyay mannitol oo lagu qaboojiyay barafaysan (Jaantuska S2). Tani waxaa sababi kara walxo waaweyn oo aan si habboon ugu dheganayn biyaha. Dhammaan natiijooyinka kor ku xusan waxay muujinayaan in farsamada qalajinta buufintu ay ka ilaalin karto nanoparticles-ka insulin-ta fuuq-baxa iyo in culeysyo badan oo nanoparticles-ka insulin-ta ah la heli karo iyada oo aan lahayn wax buuxiyayaal ah ama kuwa ilaaliya.
Haysashada insulinta waxaa lagu tijaabiyay pH = 2.5 dhexdhexaad ah oo leh pepsin, trypsin, iyo α-chymotrypsin si loo muujiyo awoodda ilaalinta NPs ee ka dhanka ah dheefshiidka enzymatic ka dib fuuqbaxa. Haysashada insulinta ee NPs-ka fuuqbaxay ayaa la barbar dhigay kan NPs-ka cusub ee la diyaariyey, insulinta bilaashka ahna waxaa loo isticmaalay xakameyn taban. Daraasaddan, insulinta bilaashka ah waxay muujisay in si degdeg ah looga takhaluso insulinta 4 saacadood gudahood dhammaan saddexda daawayn ee enzymatic (Jaantuska 5a-c). Taas bedelkeeda, tijaabada ka saarista insulinta ee NPs-ka la qaboojiyey ee lagu qalajiyey mannitol iyo NPs-ka lagu buufiyey mannitol ama aan lahayn waxay muujisay ilaalin aad u sarreysa oo NPs-yadan ah oo ka dhan ah dheefshiidka enzymatic, taas oo la mid ahayd tan insulin NPs-ka cusub ee la diyaariyey (Jaantuska 1).5a-c). Iyadoo la kaashanayo nanoparticles-ka pepsin, trypsin, iyo α-chymotrypsin, in ka badan 50%, 60%, iyo 75% insulin-ta ayaa la ilaalin karaa 4 saacadood gudahood, siday u kala horreeyaan (Jaantuska 5a-c). Awooddan ilaalinta insulin-ta waxay kordhin kartaa fursadda insulin sare. nuugista dhiigga25. Natiijooyinkani waxay soo jeedinayaan in qalajinta buufinta leh ama aan lahayn mannitol iyo qalajinta qaboojinta leh mannitol ay ilaalin karto awoodda ilaalinta insulin-ta ee NP-yada ka dib fuuqbaxa.
Ilaalinta iyo sii deynta insulin-ta fuuq-baxa NP-yada: (a) ilaalinta insulin-ta ee xalka pepsin; (b) ilaalinta insulin-ta ee xalka trypsin; (c) ilaalinta insulin-ta ee xalka α-chymotrypsin; (d) Dhaqanka sii deynta NP-yada fuuq-baxa ee pH = xalka 2.5; (e) dhaqanka sii deynta NP-yada fuuq-baxa ee pH = xalka 6.6; (f) dhaqanka sii deynta NP-yada fuuq-baxa ee pH = xalka 7.0.
Insulin NP-yada qalalan ee cusub ee la diyaariyey oo dib loo habeeyay ayaa lagu dhex geliyay noocyo kala duwan oo kayd ah (pH = 2.5, 6.6, 7.0) heerkul ah 37 °C, iyagoo ku dayanaya jawiga pH ee caloosha, duodenum-ka, iyo xiidmaha yar ee sare, si loo baaro saameynta insulin-tu ku leedahay iska caabbinta insulin-ta. Hab-dhaqanka sii deynta ee deegaanno kala duwan. Kala-goynta marinnada caloosha iyo mindhicirka. pH = 2.5, NP-yada insulin-ka ku raran iyo NP-yada insulin-ta qalalan ee dib loo milicsaday waxay muujiyeen sii deynta bilowga ah ee hal saac gudaheed, oo ay ku xigto sii deynta gaabis ah 5-ta saacadood ee xigta (Sawirka 5d). Sii deyntan degdegga ah ee bilowga ah waxay u badan tahay inay ka dhalatay si degdeg ah oo dusha sare ah oo loo nuugo molecules-ka borotiinka kuwaas oo aan si buuxda u dhaqdhaqaaqin qaab-dhismeedka gudaha ee walaxda. pH = 6.5, NP-yada insulin-ta ku raran iyo NP-yada insulin-ta qalalan ee dib loo habeeyay waxay muujiyeen sii deynta siman oo gaabis ah muddo 6 saacadood ah, maadaama pH-ga xalka tijaabada uu la mid ahaa kan xalka NP-ga diyaariyay (Sawirka 5e). pH = 7, NP-yadu way xasilloonaayeen waxayna ku dhawaad ​​​​gebi ahaanba burbureen labadii saacadood ee ugu horreeyay (Sawirka 5f). Tani waa sababta oo ah ka-saarista chitosan waxay dhacdaa pH sare, taasoo keenta shabakad polymer ah oo aan aad u yar iyo sii deynta insulinta la milicsaday.
Intaa waxaa dheer, insulin NPs-ka lagu buufiyo iyada oo aan lahayn mannitol waxay muujisay muuqaal sii-deyn ah oo ka dhakhso badan NP-yada kale ee fuuq-baxa (Jaantuska 5d-f). Sida hore loogu sharraxay, insulin NPs-ka dib loo sameeyay ee la qalajiyey iyada oo aan lahayn mannitol waxay muujisay cabbirka ugu yar ee walxaha. Walxaha yaryar waxay bixiyaan meel dusha sare ah oo weyn, sidaa darteed inta badan daawada khuseysa waxay ku jiri doontaa ama u dhow dusha walxaha, taasoo keentay in si degdeg ah loo sii daayo daawada26.
Sunta NP-yada ee NP-yada waxaa lagu baaray baaritaanka MTT. Sida ku cad Jaantuska S4, dhammaan NP-yada fuuq-baxa waxaa la ogaaday inaysan saameyn weyn ku yeelan karin jiritaanka unugyada marka la eego heerarka 50-500 μg/ml, taasoo soo jeedinaysa in dhammaan NP-yada fuuq-baxa si ammaan ah loo isticmaali karo si loo gaaro daaqadda daaweynta.
Beerku waa xubinta ugu weyn ee uu insulinku ku shaqeeyo shaqadiisa jireed. Unugyada HepG2 waa xariiq unug oo hepatoma ah oo aadanaha ah oo badanaa loo isticmaalo qaabka qaadashada hepatocyte in vitro. Halkan, unugyada HepG2 waxaa loo isticmaalay in lagu qiimeeyo qaadashada unugyada ee NP-yada fuuqbaxay iyadoo la adeegsanayo hababka qaboojinta-qalajinta iyo qalajinta buufinta. Qaadashada unugyada iyadoo la adeegsanayo sawirka laysarka confocal iyadoo la adeegsanayo cytometry socodka iyo aragga ka dib dhowr saacadood oo la isku daray iyadoo la isticmaalayo insulin FITC oo bilaash ah oo leh xoog dhan 25 μg/mL, NP-yada FITC ee insulin-ka lagu shubay ee cusub iyo NP-yada fuuqbaxay ee FITC ee insulin-ka lagu shubay ee isku mid ah fiirsashada insulin-ka. Daawaynta microscopy-ga tirada (CLSM) ayaa la sameeyay. NP-yada Lyophilized oo aan lahayn mannitol ayaa la burburiyay intii lagu jiray fuuqbaxa mana lagu qiimeyn baaritaankan. Xoogga iftiinka gudaha ee NP-yada insulin-ka lagu shubay ee cusub, NP-yada lyophilized oo leh mannitol, iyo NP-yada la qalajiyey ee la qalajiyey oo leh iyo aan lahayn mannitol (Jaantuska 6a) waxay ahaayeen 4.3, 2.6, 2.4, iyo 4.1-laab ka sarreeya kuwa bilaashka ah. kuwa. FITC-kooxda insulin, siday u kala horreeyaan (Jaantuska 6b). Natiijooyinkani waxay soo jeedinayaan in insulin-ta la duubay ay ka awood badan tahay qaadashada unugyada marka loo eego insulin-ta bilaashka ah, inta badan sababtoo ah cabbirka yar ee nanoparticles-ka insulin-ta lagu shubay ee lagu soo saaray daraasadda.
Qaadashada unugyada HepG2 ka dib 4 saacadood oo lagu daray NP-yada cusub ee la diyaariyey iyo NP-yada fuuqbaxay: (a) Qaybinta qaadashada FITC-insulin ee unugyada HepG2.(b) Celceliska joomatari ee xoojinta fluorescence-ka oo lagu falanqeeyay cytometry socodka (n = 3), *P < 0.05 marka la barbar dhigo insulinta bilaashka ah.
Sidoo kale, sawirada CLSM waxay muujiyeen in xoojinta iftiinka FITC ee NP-yada cusub ee FITC-insulin-ka lagu shubay iyo NP-yada buufinta lagu shubay ee FITC-insulin-ka lagu shubay (aan lahayn mannitol) ay aad uga xoog badnaayeen kuwa muunadaha kale (Jaantuska 6a). Intaa waxaa dheer, marka lagu daro mannitol, dheellitirka sare ee xalka ayaa kordhiyay iska caabbinta qaadashada unugyada, taasoo keentay hoos u dhaca faafitaanka insulin-ta. Natiijooyinkani waxay soo jeedinayaan in NP-yada aan buufinta lahayn ee mannitol-ka lagu qalajiyay ay muujiyeen waxtarka ugu sarreeya ee qaadashada unugyada sababtoo ah cabbirkooda walxaha ayaa ka yaraa kan NP-yada la qaboojiyey ka dib markii dib loo kala diro.
Chitosan (celcelis ahaan miisaanka molecular 100 KDa, 75–85% deacetylated) waxaa laga soo iibsaday Sigma-Aldrich. (Oakville, Ontario, Canada). Sodium tripolyphosphate (TPP) waxaa laga soo iibsaday VWR (Radnor, Pennsylvania, USA). Insulin-ka aadanaha ee dib loo isku daray ee loo isticmaalay daraasaddan wuxuu ka yimid Fisher Scientific (Waltham, MA, USA). Insulin-ka aadanaha ee Fluorescein isothiocyanate (FITC) oo lagu calaamadeeyay fluorescein isothiocyanate (FITC) iyo 4′, 6-diamidino-2-phenylindole dihydrochloride (DAPI) waxaa laga soo iibsaday Sigma-Aldrich. (Oakville, Ontario, Canada). Khadka unugyada HepG2 waxaa laga helay ATCC (Manassas, Virginia, USA). Dhammaan walxaha kale ee firfircoon waxay ahaayeen kuwo falanqayn ama chromatographic ah.
Diyaari xal CS ah oo 1 mg/ml ah adigoo ku milmaya biyo labanlaab ah oo la sifeeyay (biyo DD) oo ka kooban 0.1% acetic acid. Diyaari xalal 1 mg/ml ah oo TPP iyo insulin ah adigoo ku milmaya biyaha DD iyo 0.1% acetic acid, siday u kala horreeyaan. Emulsion-ka kahor waxaa lagu diyaariyey polytron PCU-2-110 homogenizer xawaare sare leh (Brinkmann Ind. Westbury, NY, USA). Habka diyaarinta waa sidan soo socota: marka hore, 2ml oo xal TPP ah ayaa lagu daraa 4ml oo xal insulin ah, isku darkana waxaa la walaaqayaa 30 daqiiqo oo si buuxda ayaa loo isku darayaa. Kadib, xalka isku dhafan waxaa lagu daray hoos u dhac ku yimaada xalka CS iyada oo loo marayo sirinji iyadoo la isticmaalayo walaaq degdeg ah (10,000 rpm). Isku darka waxaa lagu hayay walaaq xawaare sare leh (15,000 rpm) qubeys baraf ah muddo 30 daqiiqo ah, waxaana lagu hagaajiyay pH gaar ah si loo helo insulin NPs isku xiran. Si loo sii mideeyo loona yareeyo cabbirka walxaha insulin NPs, waxaa lagu walaaqay 30 daqiiqo oo dheeraad ah oo lagu qubeysto baraf iyadoo la isticmaalayo sonicator nooca baaritaanka ah (UP 200ST, Hielscher Ultrasonics, Teltow, Jarmalka).
Insulin NPS waxaa lagu tijaabiyay dhexroorka celceliska Z, tusmada kala-soocidda polydipersity (PDI) iyo awoodda zeta iyadoo la adeegsanayo cabbiraadaha kala-soocidda iftiinka firfircoon (DLS) iyadoo la adeegsanayo Litesizer 500 (Anton Paar, Graz, Austria) iyadoo lagu qasayo biyaha DD heerkul ah 25°C. Qaab-dhismeedka iyo qaybinta cabbirka waxaa lagu gartaa mikroskoobka elektaroonigga gudbinta Hitachi H7600 (TEM) (Hitachi, Tokyo, Japan), sawirradana waxaa lagu falanqeeyay iyadoo la adeegsanayo barnaamijka sawir-qaadista Hitachi (Hitachi, Tokyo, Japan). Si loo qiimeeyo waxtarka kaabsalka (EE) iyo awoodda rarista (LC) ee insulin NPs, NPs-yada waxaa lagu tuubay tuubooyin ultrafiltration ah oo leh miisaan molecular ah oo 100 kDa ah oo lagu centrifuged 500 xg muddo 30 daqiiqo ah. Insulin aan la daboolin oo ku jirta shaandhada waxaa lagu cabbiray iyadoo la isticmaalayo nidaamka Agilent 1100 Series HPLC (Agilent, Santa Clara, California, USA) oo ka kooban bambo quaternary ah, autosampler, kuleyliyaha tiirka, iyo DAD detector. Insulin waxaa lagu falanqeeyay tiir C18 ah (Zorbax, 3.5 μm, 4.6 mm × 150 mm, Agilent, USA) waxaana lagu ogaaday 214 nm. Marxaladda guurguura waxay ahayd acetonitrile iyo biyo, oo ka kooban 0.1% TFA, saamiga kala-goynta laga bilaabo 10/90 ilaa 100/0, waxayna socotay 10 daqiiqo. Marxaladda guurguura waxaa lagu shubay heerka socodka oo ah 1.0 ml/daqiiqo. Heerkulka tiirka waxaa loo dejiyay 20 °C. Xisaabi boqolleyda EE iyo LC adoo isticmaalaya isle'egyada.(1) iyo Eq.(2).
Saamiyada CS/insulin ee kala duwan oo u dhexeeya 2.0 ilaa 4.0 ayaa la tijaabiyay si loo wanaajiyo insulin NP. Qaddar kala duwan oo xalka CS ah ayaa lagu daray inta lagu guda jiray diyaarinta, halka isku darka insulin/TPP uu ahaa mid joogto ah. NP-yada insulin-ka waxaa lagu diyaariyey heerka pH ee 4.0 ilaa 6.5 iyadoo si taxaddar leh loo xakameynayo pH-ga isku darka ka dib markii lagu daray dhammaan xalalka (insulin, TPP iyo CS). Cabbirka EE iyo walxaha nanoparticles-ka insulin-ka waxaa lagu qiimeeyay qiimayaal pH oo kala duwan iyo saamiga cufka CS/insulin si loo wanaajiyo sameynta NP-yada insulin-ka.
Insulin-ta NP-yada la hagaajiyay ayaa la saaray weelka aluminiumka waxaana lagu daboolay unugyo lagu dhejiyay cajalad. Ka dib, weelasha la xiray waxaa la dhigay qalajiyaha qaboojiyaha Labconco FreeZone (Labconco, Kansas City, MO, USA) oo lagu qalabeeyay qalajiyaha saxaaradda. Heerkulka iyo cadaadiska faakuumka waxaa la dhigay -10 °C, 0.350 Torr labadii saacadood ee ugu horreysay, iyo 0 °C iyo 0.120 Torr 22-kii saacadood ee soo haray ee 24-ka saacadood si loo helo NP-yada insulin-ta qalalan.
Qalajiyaha Buufinta yar ee Buchi B-290 (BÜCHI, Flawil, Switzerland) ayaa loo isticmaalay in lagu soo saaro insulin ku duuban. Xuduudaha qalajinta ee la xushay waxay ahaayeen: heerkulka 100 °C, socodka quudinta 3 L/daqiiqo, iyo socodka gaaska 4 L/daqiiqo.
Insulin NPs ka hor iyo ka dib fuuqbaxa waxaa lagu gartaa iyadoo la adeegsanayo spectroscopy FTIR-ATR. Nanoparticles-ka fuuqbaxay iyo sidoo kale insulin bilaash ah iyo chitosan ayaa lagu falanqeeyay iyadoo la isticmaalayo Spectrum 100 FTIR spectrophotometer (PerkinElmer, Waltham, Massachusetts, USA) oo lagu qalabeeyay qalab muunad qaadis ah oo ATR ah oo caalami ah (PerkinElmer, Waltham, Massachusetts, USA). Celceliska calaamadaha waxaa laga helay 16 sawir oo xallin ah 4 cm2 oo ku jira inta jeer ee u dhaxaysa 4000-600 cm2.
Qaab-dhismeedka insulin-ta qalalan ee NP-yada waxaa lagu qiimeeyay sawirrada SEM ee insulin-ta NP-yada la qaboojiyey iyo kuwa la buufiyey ee lagu qabtay Helios NanoLab 650 Focused Ion Beam-Scanning Electron Microscope (FIB-SEM) (FEI, Hillsboro, Oregon, USA). Halbeegga ugu weyn ee la isticmaalay wuxuu ahaa danabka 5 keV iyo hadda 30 mA.
Dhammaan NP-yada insulin-ta ee fuuqbaxay ayaa dib loogu milmay biyaha dd. Cabbirka walxaha, PDI, EE iyo LC ayaa mar kale la tijaabiyay iyadoo la adeegsanayo isla habka hore loo soo sheegay si loo qiimeeyo tayadooda ka dib fuuqbaxa. Xasilloonida NP-yada anhydroinsulin ayaa sidoo kale lagu cabiray tijaabinta sifooyinka NP-yada ka dib kaydinta dheer. Daraasaddan, dhammaan NP-yada ka dib fuuqbaxa waxaa lagu kaydiyay qaboojiyaha muddo saddex bilood ah. Saddex bilood ka dib kaydinta, NP-yada waxaa lagu tijaabiyay cabbirka walxaha qaab-dhismeedka, PDI, EE iyo LC.
Ku milmi 5 mL oo NPs la isku daray 45 mL oo ka kooban dareere caloosha ah oo la sawiray (pH 1.2, oo ka kooban 1% pepsin), dareere mindhicirka ah (pH 6.8, oo ka kooban 1% trypsin) ama xal chymotrypsin ah (100 g/mL, oo ​​ku jira phosphate buffer, pH 7.8) si loo qiimeeyo waxtarka insulinta ee ilaalinta NPs ka dib fuuqbaxa. Waxaa lagu kululeeyay 37°C iyadoo xawaaraha kacsanaanta uu yahay 100 rpm.500 μL oo xalka ah ayaa la ururiyay waqtiyo kala duwan waxaana go'aamiyay fiirsashada insulinta HPLC.
Hab-dhaqanka sii deynta in vitro ee insulinta cusub ee la diyaariyey iyo kuwa fuuqbaxay waxaa lagu tijaabiyay habka bacda dialysis-ka (gooynta miisaanka molecular-ka 100 kDa, Spectra Por Inc.). NP-yada qalalan ee cusub ee la diyaariyey iyo kuwa dib loo habeeyay ayaa lagu shubay dareere pH 2.5, pH 6.6, iyo pH 7.0 (0.1 M phosphate-buffered saline, PBS) si loogu ekaado jawiga pH ee caloosha, duodenum, iyo xiidmaha yar ee sare, siday u kala horreeyaan. Dhammaan muunadaha waxaa lagu kululeeyay 37 °C iyadoo si joogto ah loo ruxayo 200 rpm. Dareeraha ka nuug bacda dialysis-ka 5 mL waqtiyada soo socda: 0.5, 1, 2, 3, 4, iyo 6 saacadood, isla markiibana ku buuxi mugga dialysate cusub. Wasakhowga insulin-ka ee dareeraha waxaa falanqeeyay HPLC, heerka sii deynta insulin-ta ee nanoparticles-ka waxaa lagu xisaabiyay saamiga insulin-ta bilaashka ah ee la sii daayay ilaa insulin-ta guud ee ku jirta nanoparticles (Isleegta 3).
Unugyada kansarka beerka ee unugyada aadanaha ee HepG2 waxaa lagu beeray saxanno dhexroorkoodu yahay 60 mm iyadoo la adeegsanayo Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) oo ka kooban 10% serumka lo'da ee uurjiifka, 100 IU/mL penicillin, iyo 100 μg/mL streptomycin29. Dhaqamada waxaa lagu hayay 37°C, 95% qoyaan qaraabo ah, iyo 5% CO2. Si loo sameeyo baaritaanno qaadashada, unugyada HepG2 waxaa lagu beeray 1 × 105 unug/ml iyadoo lagu rakibayo nidaam sawir ah oo 8-well ah oo Nunc Lab-Tek ah (Thermo Fisher, NY, USA). Tijaabooyinka sunta ah ee cytotoxicity-ga, waxaa lagu beeray saxanno 96-well ah (Corning, NY, USA) cufnaan ah 5 × 104 unug/ml.
Baaritaanka MTT waxaa loo isticmaalay in lagu qiimeeyo sunta sunta ah ee insulinta cusub ee la diyaariyey oo fuuq-baxay NPs30. Unugyada HepG2 waxaa lagu beeray saxanno 96-god ah oo cufnaantoodu tahay 5 × 104 unug/mL waxaana la beeray 7 maalmood ka hor baaritaanka. Insulin NPs waxaa lagu qasi jiray tirooyin kala duwan (50 ilaa 500 μg/mL) oo ku jira habka dhaqanka ka dibna loo mariyo unugyada. Ka dib 24 saacadood oo la shiiday, unugyada waxaa lagu dhaqay 3 jeer PBS waxaana lagu dhex geliyay dhexdhexaad ka kooban 0.5 mg/ml MTT muddo 4 saacadood ah oo dheeraad ah. Sunta sunta ah waxaa lagu qiimeeyay iyadoo la cabbirayo hoos u dhaca enzymatic ee tetrazolium MTT jaalaha ah ilaa formazan guduudan 570 nm iyadoo la adeegsanayo akhristaha saxanka Tecan infinite M200 pro spectrophotometer (Tecan, Männedorf, Switzerland).
Waxtarka qaadashada unugyada ee NPs waxaa lagu tijaabiyay mikroskoobka sawirka laysarka ee confocal iyo falanqaynta cytometry-ka socodka. Ceel kasta oo ka mid ah nidaamka slide-ka qolka Nunc Lab-Tek waxaa lagu daaweeyay FITC-insulin bilaash ah, FITC-insulin-loaded NPs, waxaana dib loo habeeyay 25 μg/mL oo ah NP-insulin FITC-insulin NPs oo qalalan isla markaana la kululeeyay 4 saacadood. Unugyada waxaa lagu dhaqay 3 jeer PBS waxaana lagu hagaajiyay 4% paraformaldehyde. Nuclei waxaa lagu rinjiyeeyay 4′, 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI). Deegaanka insulin-ka waxaa lagu arkay iyadoo la isticmaalayo sawir-gacmeedka laysarka Olympus FV1000 / mikroskoobka confocal laba-photon (Olympus, Shinjuku City, Tokyo, Japan). Falanqaynta socodka cytometry, isku-darka isku midka ah ee 10 μg/mL FITC-insulin oo aan lahayn, FITC-insulin-loaded, iyo FITC-insulin NPs oo qalalan oo la milmay ayaa lagu daray 96-ceel oo lagu beeray unugyada HepG2 iyo lagu shubay muddo 4 saacadood ah. Ka dib 4 saacadood oo la shiiday, unugyada ayaa laga saaray oo 3 jeer lagu dhaqay FBS. 5 × 104 unug muunad kasta waxaa lagu falanqeeyay BD LSR II flow cytometer (BD, Franklin Lakes, New Jersey, Mareykanka).
Dhammaan qiimayaasha waxaa lagu muujiyay celcelis ahaan ± leexashada heerka caadiga ah. Isbarbardhigga u dhexeeya dhammaan kooxaha waxaa lagu qiimeeyay iyadoo la adeegsanayo hal-dhinac ANOVA ama t-test iyadoo la adeegsanayo IBM SPSS Statistics 26 ee Mac (IBM, Endicott, New York, USA) iyo p < 0.05 waxaa loo arkay mid muhiim ah tirakoob ahaan.
Daraasaddani waxay muujinaysaa dabacsanaanta iyo awoodda qalajinta buufinta si ay u fuuq-baxaan nanoparticles-ka chitosan/TPP/insulin-ka ee isku xiran iyadoo dib-u-habayn wanaagsan la barbar dhigay hababka qaboojinta-qallajinta caadiga ah iyadoo la adeegsanayo wakiilada bulking-ka ama awoodda cryoprotectants iyo awoodda culeyska oo sareysa. Nanoparticles-ka insulin-ka ee la hagaajiyay waxay keeneen cabbir celcelis ahaan walxaha ah 318 nm iyo hufnaan daboolan oo ah 99.4%. Natiijooyinka SEM iyo FTIR ka dib fuuq-baxa waxay muujiyeen in qaab-dhismeedka wareegsan lagu ilaaliyay oo keliya NP-yada la buufiyay oo leh iyo aan lahayn mannitol oo lagu lyophilized mannitol, laakiin NP-yada lyophilized ee aan lahayn mannitol ayaa la burburiyay intii lagu jiray fuuq-baxa. Tijaabada awoodda dib-u-habaynta, nanoparticles-ka insulin-ka ee lagu buufiyo iyada oo aan lahayn mannitol waxay muujisay cabbirka ugu yar ee walxaha iyo rarka ugu sarreeya marka dib-u-habaynta la sameeyo. Dhaqamada sii deynta ee dhammaan NP-yadan fuuq-baxa waxay muujiyeen in si degdeg ah loogu sii daayay xalalka pH = 2.5 iyo pH = 7, iyo xalka pH aad u deggan oo ah pH = 6.5. Marka la barbardhigo NP-yada kale ee fuuq-baxa ee dib loo xalliyay, NP-yada ayaa la qalajiyey iyada oo aan lahayn mannitol wuxuu muujiyay sii deynta ugu dhaqsaha badan. Natiijadani waxay la jaanqaadaysaa tii lagu arkay tijaabada qaadashada unugyada, maadaama NP-yada la buufiyay ee aan lahayn mannitol ay ku dhawaad ​​​​si buuxda u ilaalinayeen hufnaanta qaadashada unugyada ee NP-yada cusub ee la diyaariyey. Natiijooyinkani waxay soo jeedinayaan in nanoparticles-ka insulin-ta qalalan ee lagu diyaariyey qalajinta buufinta aan lahayn mannitol ay ugu habboon yihiin in si dheeraad ah loogu farsameeyo qaababka kale ee qiyaasta aan biyaha lahayn, sida kiniiniyada afka laga qaato ama filimada biodhesive.
Sababo la xiriira arrimaha hantida garaadka, xogta la soo saaray iyo/ama la falanqeeyay intii lagu jiray daraasadda hadda jirta si guud looma heli karo, laakiin waxaa laga heli karaa qorayaasha ku habboon marka la codsado.
Kagan, A. Sonkorowga Nooca 2aad: Asalka bulshada iyo sayniska, dhibaatooyinka caafimaad, iyo saameynta bukaanada iyo kuwa kale. (McFarlane, 2009).
Singh, AP, Guo, Y., Singh, A., Xie, W. & Jiang, P. Horumarinta kaabsaleynta insulin-ta: ma suurtagal baa in afka laga qaato hadda? J. Pharmacy.bio-pharmacy.reservoir.1, 74–92 (2019).
Wong, CY, Al-Salami, H. & Dass, CR Horumarradii ugu dambeeyay ee nidaamyada keenista liposome-ka ee afka laga qaato ee loogu talagalay daaweynta sonkorowga.Interpretation.J. Pharmacy.549, 201–217 (2018).